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一、仪器安装应注意事项 1、安装本仪器的实验台应水平、稳固，并具有足够的放置空间； 2、避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装仪器，否则将会影响仪器的正常运转并且缩短仪器的使用寿命； 3、由于仪器所用的溶剂是易燃并且有毒的，故安装仪器的房间应保证通风，且具有向外排风的装置，否测会引起中毒或身体不适，也会引起火灾； 4、安装四个以上的三芯电源插座（220V，10A）,必须具有专门的接地线（注意绝不能将电源线的中性线作为接地线），并确保仪器电源的电压稳定在交流（220V ±20V）,否测会导致仪器的不正常运作至损坏仪器； 5、实验室的室温尽可能控制在15～30℃范围内，并且波动要小；湿度在45%～80%范围内；由空调或其它设备产生的气流不要直吹仪器上，造成仪器的基线不稳；避免光线直射及振动； 6、仪器启动顺序：先开高压恒流泵和紫外检测器，待紫外检测器自检完毕，回到默认波长254nm后，打开工作站软件； 7、仪器关闭顺序：关闭氘灯，冲洗仪器及色谱柱，停泵，退出工作站软件，关闭仪器的电源开关。 8、仪器应由专人负责，如果使用人员不固定，请准备《仪器使用登记本》，以明确使用情况，及时处理和保养。 二、使用流动相的注意事项 1、过滤 必须使用HPLC 级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45μm或0.22μm 薄膜过滤。 2、脱气 1）氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。 2）加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。 3）抽真空脱气法：易抽走有机相。 4）超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波震荡15~20分钟，此法效果较差，但操作简单。 3、如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相：浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜。 4、含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法： 1）先用10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min把保存在甲醇（或者乙腈）中的色谱柱冲洗40分钟以上，使色谱柱充满10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水）。 2）更换含有缓冲盐溶液的流动相。稳定后，做样品。 3）做完样品后，用10:90的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min冲洗色谱柱1小时。 4）再用甲醇（或者乙腈），泵的流速：1ml/min 冲洗系统，并将色谱柱和系统保存在甲醇（或者乙腈）中，清洗时间至少为1小时。 三、流动相的过渡(流动相的反相系统改变为正相系统) 在更换流动相进行分析时，一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。如果前一种使用的流动相和所更换的流动相不能够相溶，那就要要采用一种与这二者都能够相溶的流动相进行过渡。较为常用的过渡流动相为异丙醇，但实际操作中要看具体情况而定，原则就是采用与这二种需更换的流动相都能够相溶的流动相。一般清洗的时间为30-40 分钟，直至系统完全稳定。 四、带柱后清洗装置的恒流泵所用的清洗液 1、反相系统所用的清洗液是10%异丙醇的水溶液（经过滤后的）； 2、正相系统所用的清洗液是纯异丙醇试剂（经过滤后的）。 （注意：带柱后清洗装置的恒流泵，其清洗装置不能没有清洗液。如果没有清洗液将会造成其清洗装置的密封圈的损毁。） 五、管路连接的注意事项 ： 1、将管子完全插入开口端，直至其与开口端的末端相碰为止。否则将产生死体积，引起峰展宽。 2、为了使柱外效应减到最小，获得理想的分析结果，尽量使用管径细的管路作为连接。 3、管路接头不要拧的过紧，以防损坏螺纹。 六、使用进样阀的注意事项 : 1、液相进样针均为平头，切忌不能使用尖头进样针，否则将会损毁进样阀。 2、LOAD为进样锁定位置，INJECT为进样分析位置，互切换时尽量速度快 ，不得在当中停留，否则会导致系统压力加大。 3、进样量需至定量环的3-5倍以上才能精确定量。 4、两种不同样品进样之间应该分别用甲醇清洗LOAD和INJECT位置，以防样品交叉污染。 高效液相色谱仪（HPLC）的几个使用问题 1、色谱柱中的流动相会排干吗？ 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？ 事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂使色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要以1mL/min的流速）一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。 2、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？ 如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。 使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个需要考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。 使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。 3、如何预防液相泵的故障？ 要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，对流动相进行过滤和脱气。下面列出预防泵故障的几项措施: 1）用高质量试剂和HPLC级溶剂 2）过滤流动相和溶剂 3）脱气 4）每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液 5）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中 6）定期更换垫圈 7）需要时加润滑油 8）查阅有关泵操作手册中的其它建议 HPLC系统应用秘诀 秘诀1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验， 这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。 秘诀2 ：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。 秘诀3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。 |
